C18色谱柱是一种常见的液相色谱柱,广泛应用于分析和纯化有机化合物。
一、结构
通常由石英或玻璃制成,柱身内壁被涂上一层由十八烷基硅烷(C18)组成的固定相。C18固定相是一种长链烷基官能化硅烷,在分离过程中起到吸附分离作用。
二、原理
在C18色谱柱中,样品溶解在流动相中,然后通过柱内涂层的C18固定相。在这个过程中,样品中的分子与C18固定相之间发生了静电相互作用、范德华力和氢键等相互作用,使得不同成分的分子在固定相表面停留时间不同,从而实现分离。
三、工作原理
工作时,样品先通过进样口进入柱体。然后,在移动相的推动下,样品溶液沿柱体内壁流动。在这个过程中,样品分子与C18固定相之间的相互作用发生改变,不同成分的分子会在柱体内停留的时间不同,并逐渐分离出来。
四、应用
1.分析有机物质
主要用于分析有机物质,如药物、天然产物、化妆品等。其具有高分离效率、广泛的应用范围和较长的使用寿命等优点。
2.生物制品纯化
还可以用于生物制品的纯化,如蛋白质、肽等。由于其具有较高的选择性和灵敏度,因此在生物制品纯化领域得到了广泛应用。
3.分析环境污染物
也可用于分析环境污染物,如农药、有机溶剂等。其高效的分离能力和选择性使其成为分析环境污染物的理想工具。
五、注意事项
在使用C18色谱柱时,需要注意以下几点:
1.保持柱体干燥
C18固定相对水敏感,因此需要避免柱体潮湿,以免影响分离效果。
2.避免超载
在样品进入柱体前,需要对样品进行预处理,并避免超过柱子的较大负荷容量,以保证分离效果。
3.选择合适的流动相
不同的样品需要选择不同的流动相,并且流速也需根据实验要求进行调整,以达到较佳效果。